即用型ECM試劑盒(兔IgG)免疫檢測

商品屬性：

商品介紹：

用途：適于一抗為兔IgG的Western Blotting 檢測保存條件：4℃可保存一年

產(chǎn)品規(guī)格：1.封閉試劑：10g 蛋白質(zhì)干粉(脫脂奶粉)

2．HRP 標(biāo)記羊抗兔IgG：0.1ml(親和純化抗體，經(jīng)過人血清吸附以去除交叉抗體，按照 1：2000-10000 稀釋)

3．即用型 ECM 顯色劑：A 液 50ml B 液 50ml

工作原理：

蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學(xué)分離純化技術(shù)之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動的現(xiàn)象。根據(jù)所采用的支持物不同,可分為：瓊脂糖凝膠電泳、淀粉凝膠電泳、聚丙烯凝膠電泳等。其中以聚丙烯凝膠電泳(PAGE)廣泛。它的優(yōu)點為：無電滲作用,樣品用量少(1-100μg),分辨率高,可檢出 10-9

-10-12mol的樣品,凝膠機械強度大,重復(fù)性

好以及可以通過調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠。SDS-PAGE 是的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方式,它根據(jù)蛋白分子大小不同，遷移速率的不同而達到分離目的，特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測和測定蛋白質(zhì)分子量。

免疫印跡是將凝膠電泳的高分辨力和免疫化學(xué)檢測的特異性融為一體。免疫印跡技術(shù)首先借助凝膠電泳將蛋白質(zhì)抗原分離，然后將凝膠中的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印到膜上使之成為被分離的一個拷貝。

免疫印跡為檢測樣品中是否存在目的蛋白提供一種可靠的方法，該法鑒定蛋白質(zhì)的原理是根據(jù)被測蛋白能與特異性抗體結(jié)合的特性并通過相對遷移率來體現(xiàn)該蛋白的分子量。如果想要了解樣品中是否存在某一抗原，以及該抗原的含量或該抗原多肽鏈的相對分子質(zhì)量以及亞型，是否與其他蛋白結(jié)合，蛋白質(zhì)的酪氨殘基是否發(fā)生磷酸化等有關(guān)問題均可采用免疫印跡。

免疫印跡包括多個簡單步驟，可在一到兩天完成，該方法具有高效，簡便，靈敏等特點。

實驗操作步驟：

1．蛋白質(zhì)的樣品制備：

a．細胞樣品的制備：

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細胞。?

取出保存于低溫下的細胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細胞培養(yǎng)基和細胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細胞凍存與復(fù)蘇：?

細胞系的凍存是將生長較好的傳代細胞懸浮在加有冷凍保護劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融”，?以較大限度地保存細胞活力。?

細胞計數(shù)：?

制備細胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細胞或收集懸浮培養(yǎng)細胞，?制成單個細胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細胞數(shù)，?細胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細胞進行染色，?并觀察細胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進一步確認。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細胞，?并進行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：