注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
多食棘阿米巴屬通用PCR檢測試劑盒廠家 | Acanthamoeba spp.PCR | BK-P8745 |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
斯皮諾素 CAS 72063-39-9 * 規(guī)格： 20mg
人參皂苷F2 CAS 62025-49-4 * 規(guī)格： 20mg
5-羥基-7,8-二甲氧基黃 CAS 3570-62-5 * 規(guī)格： 10mg
3-O-沒食子酰粘酸 CAS * 規(guī)格： 10mg
木犀草素 CAS 491-70-3 * 規(guī)格： 20mg
雷公藤乙素 CAS 38647-10-8 * 規(guī)格： 20mg
梔子苷 CAS 24512-63-8 * 規(guī)格： 20mg
黃楊堿 CAS 860-79-7 * 規(guī)格： 20mg
異去氫鉤藤堿 CAS 51014-29-0 * 規(guī)格： 20mg
石蒜堿 CAS 476-28-8 * 規(guī)格： 20mg
麥冬皂苷D CAS 945619-74-9 * 規(guī)格： 20mg
黨參炔苷 CAS 136085-37-5 * 規(guī)格： 10mg
催吐蘿芙木定 CAS 3911-19-1 * 規(guī)格： 10mg
川陳皮素 CAS 10236-47-2 * 規(guī)格： 20mg
7-表-10-去乙?；仙即迹?5%） CAS 78432-77-6 * 規(guī)格： 20mg
多食棘阿米巴屬通用PCR檢測試劑盒廠家2-氯-6-甲氧喹啉 193.63 2- -6-, a*：13676-02-3分子量： C10H8ClNO
4-甲-3-溴吡 172.02 4- methyl -3-*：3430-22-6分子量： C6H6BrN
N-乙-4-甲酸甲酯 N- ethyl -4- methyl piperidine*：分子量：
1,3-二氟 114.09 Two - 1,3-*：372-18-9分子量： C6H4F2
育亨賓 Yohimbine hydrochloride 390.90368分子量：C21H27ClN2O3*：65-19-0
三氟甲磺酸銅 361.67 三氟甲磺酸銅*：34946-82-2分子量： C2CuF6O6S2
1-甲-4-(三丁錫)-1H-吡唑 371.14868 1- methyl -4- (three butyl tin) -1H- pyrazole*：179055-21-1分子量： C16H32N2Sn
2--4-氯嘧 129.55 2- amino -4-*：3993-78-0分子量： C4H4ClN3
2,5-二氟溴 192.99 2,5- two fluorine bromine*：399-94-0分子量： C6H3BrF2
奧達唑 249.27 Up to*：20559-55-1分子量： C12H15N3O3
考馬斯亮藍R250 Kaumas blue R250 825.97分子量： C45H44N3NaO7S2*：6104-59-2
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
