原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
牛腸道病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格 | Bovine Enterovirus（BEV）RTPCR | BK-P8907 |
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實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Intelectin 1 (ITLN1)
改良克氏雙糖培養(yǎng)基 規(guī)格： 250g 用途： 用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的鑒定
大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠腎足突細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarum帚石南棒桿菌 Corynebacterium callunae
MS751(人頸表細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
酪蛋白瓊脂 規(guī)格： 100g 用途： 用于鑒別蠟樣芽孢桿菌分解酪蛋白試驗 (GB/T4789.28-2003中4.65，GB/T4789.14-2003)。
Sp2/0-Ag14(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
SHG-44 (人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)丁酸梭菌 Clostridium butylicom
血管生成素樣蛋白6(ANGPTL6)重組蛋白英文名稱：Recombinant Angiopoietin Like Protein 6 (ANGPTL6)
GBC-SD(人膽囊細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
牛腸道病毒PCR檢測試劑盒規(guī)格米勒-海頓肉湯/M湯/酪蛋白肉湯/水解酪蛋白肉湯/MHB用于抗菌素藥物敏感性試驗250克國產(chǎn)/進(jìn)口
燕麥鐮刀菌 Gibberella avenacea球型芽孢桿菌 Bacillus sphaerious
NCI-H1975(人肺腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人腺細(xì)胞 MX-1
胰蛋白酶(含100mL 酶解緩沖)10mL
真姬菇 Hypsizigus marmoreusWM451, 人色素瘤細(xì)胞
光帽鱗傘 Pholiota nameko熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
綠色木霉 Trichoderma viride鏈霉菌 Streptomyces sp.
卵黃鈉瓊脂培養(yǎng)基/Egg-Yolk Salt Agar金黃色葡萄球菌的選擇性分離250克國產(chǎn)/進(jìn)口
負(fù)鼠腎細(xì)胞 OK
PLC/PRF/5(人肝亞力山大細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
