技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
肝片吸蟲PCR檢測試劑盒廠家 | Fasciola hepaticaPCR | BK-P9161 |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
七烷 CAS * 規(guī)格： 100mg
槲葉 CAS * 規(guī)格： 1g
功勞木 CAS * 規(guī)格： 0.5g
十七碳酸甲酯 CAS * 規(guī)格： 20mg
百部(對葉百部) CAS * 規(guī)格： 2g
20(s)-原人參二醇 CAS 30636-90-9 * 規(guī)格： 20mg
萘丁美 CAS * 規(guī)格： 100mg
旋渦混合器 CAS * 規(guī)格： 臺
塞利洛爾 CAS * 規(guī)格： 100mg
阿那曲唑 CAS 120511-73-1 * 規(guī)格： 100mg
利可君 CAS 1950-36-3 * 規(guī)格： 100mg
牛白藤 CAS * 規(guī)格： 1g
非索定 CAS 153439-40-8 (138452-21-8) * 規(guī)格： 100mg
冬夏草 CAS * 規(guī)格： 1g
凝乳酶 CAS * 規(guī)格： 35mg/支
肝片吸蟲PCR檢測試劑盒廠家胰蛋白酶(含100mL 酶解緩沖液)10mL
小鼠淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
植物桿菌 Lactobacillus plantarum
費(fèi)氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii
MOLT-4全細(xì)胞裂解液100μg
覃狀青霉 Penicillium paxilli
玫瑰小雙孢菌 Microbispora rosea
人非小細(xì)胞肺細(xì)胞
葡枝根霉 Rhizopus stolonifer
貝葉多孔菌
麥角甾苷規(guī)格：
大鼠直腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
異常漢遜酵母 Hansenula anomala
涇陽鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis
NCI-H520(人肺鱗細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
桂色曲霉 Aspergillus cinnamomeus
