技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) |
副流感病毒型PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格 | Parainfluenza Virus 5（PIV5)5PCR | BK-P9527 |
原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
綿羊褪黑素（MT/MLT）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊瘦素（leptin）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊生長(zhǎng)激素(GH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊雌二醇(E2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊表皮生長(zhǎng)因子（EGF）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊白介素2受體(IL-2R)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊白介素2(IL-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊白介素1β(IL-1β)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿羊白介素1(IL-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿/山羊孕激素/孕酮（PROG）ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿/山羊胰島素(INS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
綿/山羊催乳素(PRL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒
副流感病毒型PCR檢測(cè)試劑盒規(guī)格白介素-1受體相關(guān)激酶2 0.5mgIRAK 2
胃粘液素抗原 0.5mgMUC5AC/Mucin 5AC(Gastric Mucin M1)
多苷二磷酸多聚酶抗原(N端) 0.5mgPARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus
運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活蛋白結(jié)合蛋白1抗原 0.5mgSIP1 peptide
TRIM32抗原 0.5mgTRIM32(tripartite motif protein 32)
細(xì)胞表面趨化因子受體1抗原 0.5mgCXCR1 (CXC-chemokine receptor 1)
髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b(抗原) 0.5mgMAG-a/b (Myelin associated glycoprotein; L / S -MAG;)
淋巴細(xì)胞生成素-1（抗原） 0.5mgTSLP(Thymic stromal lymphopoietin isoform 1)
細(xì)胞角蛋白19抗原 0.5mgCytokeratin 19
三聚氰胺與牛血清白蛋白偶聯(lián)物 1mgMelamine/BSA
熒光素標(biāo)記牛IgG 0.3mlBovine IgG/FITC
熒光素Cy7標(biāo)記大鼠IgG(細(xì)胞流式同型對(duì)照) 0.1mlRat IgG/Cy7
熒光素Cy3標(biāo)記羊IgM 0.1mlGoat IgM/Cy3
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記牛血清白蛋白 0.1mlBSA/HRP
小鼠γ干擾素 96TIFN- Gamma ELISA Kit（mouse）
