特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：BCA蛋白法含量測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
檢測方法：微量法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6968
產(chǎn)品分類：蛋白含量測定系列
商品介紹：
測定意義: 樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。 測定原理： 堿性條件下，蛋白質(zhì)中半胱、胱、色、酪以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結(jié)合，生成紫色絡(luò)合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰*。 自備儀器和用品： 可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
| ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實驗方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
250mL HEPES Buffer,1M,pH6.5 HEPES Buffer,1M,pH6.5 常溫保存
1mL 小牛胸腺DNA溶液（10mg/mL） Calf Thymus DNA Solution -20℃保存
125mL RIPA Buffer,2X RIPA Buffer,2X 常溫保存
1 管 C600大腸桿菌 C600 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRetroX-IRES-DsRedExpress pRetroX-IRES-DsRedExpress 低溫運輸，-20℃保存
單增李斯特氏菌成套生化鑒定管 9種*2套/盒*5盒
2 ug pcDNA3.1（+）/CT-GFP pcDNA3.1（+）/CT-GFP 低溫運輸，-20℃保存
高滲真菌學(xué)瓊脂 Osmophilic Mycophile Agar 250g
5ku 蘋果酸脫氫 Malate Dehydrogenase 4℃保存
50T 人CYP17基因多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-RLFP) 低溫運輸，-20℃保存
5mL 星形細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
BCA蛋白法含量測試盒微量法MSH3 錯配修復(fù)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-rat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Bag1/RAP46 抑凋亡基因bag1抗體 規(guī)格: 0.1ml
TSPAN20/UPIb 四分子交聯(lián)體20抗體（四旋蛋白） 規(guī)格: 0.2ml
SAMHD1/HDDC1/MOP5 單核細胞蛋白5抗體 規(guī)格: 0.2ml
RBM5/LUCA15 瘤抑制基因LUCA15抗體 規(guī)格: 0.2ml
COLEC12 凝集胎盤蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-pig IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1ml
CLIP1/CLIP170 細胞質(zhì)連接蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-AQP2(Ser264) 磷酸化水通道蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1ml
CCL3/MIP 1α 巨噬細胞性蛋白1α抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-GPS1/CSN1(Ser474) 磷酸化G蛋白通路抑制蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時間不夠，可以延長反應(yīng)時間（反應(yīng)時間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
