本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
土壤酸性磷酸酶(SACP)測(cè)試盒可見分光光度法 | 50管/48樣 | 可見分光光度法 | BK-01S6837 |
商品介紹：
測(cè)定意義: 土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷化合物礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH顯著影響。通常按照其最適pH范圍，分為堿性、中性和酸性三種類型磷酸酶。 測(cè)定原理： 堿性環(huán)境中，S-AKP/ALP催化磷酸苯二鈉水解生成和，通過測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出S-AKP/ALP活性。 自備儀器和用品： 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、無(wú)水乙醇和甲苯。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2～3SD，作為陽(yáng)性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽(yáng)性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽(yáng)性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽(yáng)性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照，與陰性對(duì)照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長(zhǎng)期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
10ku 超氧化物歧化，人 Superoxide Dismutase -20℃保存
250mL Sodium Bicarbonate Buffer（鈉緩沖液）,0.5M,pH8.0 Sodium Bicarbonate Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
1 管 Rosetta-gami(DE3)大腸桿菌 Rosetta-gami(DE3) E.coli Strain -80℃保存
2 ug pRSET C pRSET C 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
250mL 固相RNase清除劑 Surface RNase Erasol 常溫
2 ug pcDNA6-Flag pcDNA6-Flag 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
麥芽汁 Malt Extract Medium 250g
5g 中性紅 Neutral Red 室溫保存
50T 芹菜PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
1 mg Fura-2 AM（鈣離子熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
250mL BSA Blocking Buffer in PBS BSA Blocking Buffer in PBS 常溫保存
土壤酸性磷酸酶(SACP)測(cè)試盒可見分光光度法GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體 規(guī)格: 0.2mlClassical swine fever virus, CSFV 豬瘟毒抗體 規(guī)格: 0.2ml
PID1 磷酸相互作用結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlAngiotensin III 管緊張素III抗體 規(guī)格: 0.2ml
CDK5RAP3 周期素依賴性激5激活結(jié)合蛋白C53抗體 規(guī)格: 0.2mlHSP47 熱休克蛋白-47抗體 規(guī)格: 0.1ml
Defensin β1 防御素β1抗體 規(guī)格: 0.1mlDC-SIGNR/CD299 CD299抗體 規(guī)格: 0.2ml
C12ORF63 12號(hào)染色體開放閱讀框63抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-INPPL1(Tyr1135) 肌醇聚磷酸鹽磷酸樣蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
ZNF268 鋅指脂蛋白抗體 規(guī)格: 0.1mlUBE2D1 泛素蛋白連接D1抗體 規(guī)格: 0.2ml
STAU2 雙鏈RNA結(jié)合蛋白Staufen2抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-PP2A alpha/beta(Tyr119) 磷酸化蛋酸2A（PP2Aα）抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-human IgG 兔抗人IgG 規(guī)格: 1mgCYP1A1 細(xì)胞色素P450 1A1抗體 規(guī)格: 0.1ml
C6orf150 6號(hào)染色體開放閱讀框150抗體 規(guī)格: 0.2mlCOMP/EPD1/THBS5 軟骨寡聚基質(zhì)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
PI 3 Kinase p85 beta 磷脂酰肌醇激p85β抗體 規(guī)格: 0.1mlGSTA3 S轉(zhuǎn)移A3抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-CPI17 alpha (Thr38) 磷酸化蛋酸激PKC/CPI-17抗體 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-Biotin 兔抗抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml
Dysferlin Dysferlin蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
