WT 9-7人常染色體多囊腎病上皮細(xì)胞
一、細(xì)胞基本屬性 | |
細(xì)胞名稱 | WT 9-7人常染色體多囊腎病上皮細(xì)胞 |
細(xì)胞別稱 | WT 9-7 |
商品貨號(hào) | XY-H1032 |
種屬來源 | 人 |
年齡性別 | 女性 |
組織來源 | 腎 |
生長(zhǎng)特性 | 貼壁生長(zhǎng) |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景簡(jiǎn)介 | - |
生物安全等級(jí) | - |
細(xì)胞規(guī)格 | 1×10^6cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測(cè) | 無 |
培養(yǎng)基 | DMEM + 10% fetal bovine serum (FBS) |
培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ |
凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 |
倍增時(shí)間 | ~24-30小時(shí) |
二、細(xì)胞接收后的處理
1) 收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于室溫放置約1h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2) 請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3) 貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在室溫中放置1h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的丸全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4) 細(xì)胞運(yùn)輸途中脫落操作方法：把脫落的細(xì)胞收集離心后棄上清，用PBS清洗一遍，離心棄上清，在離心管中加入1ml一酶吹散消化20秒左右，加丸全培養(yǎng)基終止消化后離心重新鋪平，剩下的貼壁細(xì)胞就按照正常貼壁細(xì)胞傳代方法操作。
5) 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的丸全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
三、細(xì)胞培養(yǎng)操作
1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL丸全培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a) 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b) 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml丸全培養(yǎng)基終止消化。
c) 輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d) 將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代注意點(diǎn)：
l 一定要PBS洗一遍。
l 細(xì)胞多觀察幾次掌握時(shí)間，不要在細(xì)胞沒有基本脫落就終止消化然后吹打下來，這樣細(xì)胞 更容易分化和死亡。
l 不要一直對(duì)細(xì)胞吹打
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a) 收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b) 根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度1×10^6~1×10^7/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c) 將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
四、培養(yǎng)注意事項(xiàng)
1) 細(xì)胞出現(xiàn)問題，予以重發(fā)情況
a) 細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)；
b) 細(xì)胞污染問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品3 天內(nèi)，給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，核實(shí)后重發(fā)；
c) 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，（需提供真實(shí)清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片），重發(fā)；
d) 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后2天后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2 小時(shí)候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；
e) 細(xì)胞活性問題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，和每天的細(xì)胞照片，核實(shí)后予重發(fā)；
f) 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3 天請(qǐng)拍照，3 天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7 天內(nèi)出現(xiàn)問題需提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題的照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的，重發(fā)。
2) 細(xì)胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況
a) 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)；
b) 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
c) 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
d) 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)；
e) 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)；
f) 收到細(xì)胞并發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于7 天的，不重發(fā)；
g) 視具體情況而定
五、注意事項(xiàng)
1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。
3. 該細(xì)胞僅供科研使用！說明書僅供參考以實(shí)際到貨說明書為準(zhǔn)！
