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上海哈靈生物科技有限公司

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抗體/蛋白HRP標(biāo)記制備試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

2017-6-16  閱讀(879)

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【詳細(xì)說(shuō)明】

 

抗體/蛋白HRP標(biāo)記制備試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

 

主要用途

 

抗體/蛋白HRP標(biāo)記制備試劑是一種旨在通過(guò)高碘酸氧化產(chǎn)生活化的辣根過(guò)氧化酶,與抗體或蛋白中氨基偶聯(lián)反應(yīng),進(jìn)一步還原和中和作用,確保復(fù)合體的穩(wěn)定的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于各種種系的抗體、純化蛋的HRP標(biāo)記。其應(yīng)用于后續(xù)WESTERN BLOT、免疫組化、ELISA等。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn),操作便捷,反應(yīng)敏感,重復(fù)性好。

 

技術(shù)背景

 

辣根過(guò)氧化酶,分子量44Kd,常作為標(biāo)記,用于免疫反應(yīng)的定量檢測(cè)(enzyme immunoassay;EIA),例如免疫印跡WESTERN BLOT、免疫檢測(cè)ELISA和免疫化學(xué)染色immunohistochemical staining等。辣根過(guò)氧化酶具有價(jià)廉、高純、高特異活性、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn),成為主要的(占80%)抗體或蛋白綴和標(biāo)記酶。基于辣根過(guò)氧化酶為糖蛋白,含有8個(gè)糖鏈,通過(guò)高碘酸避光氧化,使羥基和醛基分離后,活化的HRP既不失活,又能在堿性條件下,與所有蛋白或抗體存在的氨基進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng),形成席夫堿(Schiff's bases),進(jìn)而在酸性透析處理后去除剩余的高碘酸和預(yù)防自偶聯(lián)。經(jīng)過(guò)溫和的硼氫化氰鈉sodium cyanoborohydride)還原水合作用,以及乙醇胺(ethanolamine)或2-巰基乙胺 2-mercaptoethylamine)中和殘余的醛基,使標(biāo)記蛋白/抗體更加穩(wěn)定。  

 

產(chǎn)品內(nèi)容

 

緩沖液(Reagent A)   1毫升

標(biāo)記液(Reagent B)       50微升

還原液(Reagent C)      200微升

中和液(Reagent D)  50微升

保存液(Reagent E)   1毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書       1份

 

保存方式

 

保存-20冰箱里;有效保證6月

 

用戶自備

 

目標(biāo)抗體或蛋白:用于HRP標(biāo)記

1.5毫升離心管:用于樣品反應(yīng)操作和保存的容器

震蕩器:用于混勻反應(yīng)物

 

實(shí)驗(yàn)步驟

 

  • 移取10微升(總量100微克)用戶自備的目標(biāo)抗體或蛋白(分子量在160Kd左右或以下)
  • 加入90微升緩沖液(Reagent A),混勻
  • 加入10微升標(biāo)記液(Reagent B),混勻
  • 溫下(25℃)孵育1小時(shí)或4冰箱里孵育16小時(shí)
  • 加入10微升還原液(Reagent C),混勻
  • 室溫下孵育15分鐘
  • 加入10微升中和液(Reagent D),混勻
  • 室溫下孵育15分鐘
  • 加入130微升保存液(Reagent E),混勻
  • 獲得標(biāo)記蛋白或抗體終濃度0.6毫克/毫升
  • 即刻放進(jìn)-70保存或置于冰槽里備用
  • 或繼續(xù)后續(xù)ELISA、WESTERN BLOT、IMMUNOHISTOLOGY等

 

注意事項(xiàng)

 

  • 本產(chǎn)品為5(100微克/次)操作
  • 操作時(shí),須戴手套
  • 樣品中避免含有*(sodium azide)、Tris、甘氨酸(glycine)、氫氧化銨(NH4OH)等,否則干擾標(biāo)記
  • 如果標(biāo)記液(Reagent B)沒(méi)有充分溶解,可以放在4冰箱里72小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間后使用
  • 如果需要增加標(biāo)記量,則相應(yīng)增加試劑用量
  • 如果標(biāo)記500Kd以上的蛋白或抗體,則使用20微升標(biāo)記液(Reagent B)即可
  • 標(biāo)記效率取決于目標(biāo)蛋白或抗體與活化HRP的分子摩爾濃度比例和結(jié)構(gòu)關(guān)系
  • HRP標(biāo)記蛋白復(fù)合體在4溫度下保持4周穩(wěn)定;在-20溫度下,保持6個(gè)月穩(wěn)定
  • 標(biāo)記抗體后續(xù)應(yīng)用建議用量如下:

 

應(yīng)用

標(biāo)記抗體濃度

ELISA

250納克/毫升至2.5微克/毫升

WESTERN BLOT

0.5微克/毫升至50微克/毫升

IMMUNOHISTOLOGY

2.0微克/毫升至5.0微克/毫升

 

  • 本公司提供系列蛋白/抗體標(biāo)記試劑產(chǎn)品

 

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

 

  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
  • 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶

 

 



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