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人成纖維細胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法 采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被人成纖維細胞激活蛋白(FAP)多克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人成纖維細胞激活蛋白(FAP)濃度呈正相關,450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中人成纖維細胞激活蛋白(FAP)含量。
人成纖維細胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為0.312-80ng/ml,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(0.312-80ng/ml范圍內),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、*和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
人成纖維細胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法
人成纖維細胞激活蛋白(FAP)定量檢測方法
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