大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒說明書?
【試劑盒名稱】
大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）定量檢測試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）抗體透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值，計算樣本中大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）含量。
【大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒組成】
1 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑B液 | 6mL |
2 | 標準品 | 0.3mL*6管 | 8 | 終止液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 說明書 | 1份 |
4 | * | 1mL | 10 | 封板膜 | 2張 |
5 | 酶標試劑 | 10mL | 11 | 密封袋 | 1個 |
6 | 顯色劑A液 | 6mL |
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備注：標準品（S0→S5）濃度依次為：16、8、4、2、1、0 ng/mL.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
- 標準規(guī)格酶標儀
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水
- 一次性試管
- 吸水紙
【大鼠血漿α顆粒膜蛋白（GMP-140）ELISA試劑盒操作步驟】
1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、設置加樣孔：取足夠數(shù)量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置。
4、加標準品：標準品孔中加入標準品50μL；空白對照孔不加。
5、加待測樣本：待測樣本孔中先加入*10μL，再加待測樣本50μL；空白對照孔不加。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液100μL；空白對照孔不加。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
8、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。
3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。
5、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、*和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。
6、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。
7、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
【操作程序總結】
準備試劑，樣品和標準品
加入準備好的樣品、標準品和酶標試劑，37℃反應60分鐘
洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內讀OD值
計算
【檢測范圍】
0.5ng/mL - 16ng/mL
【規(guī)格】
96T/盒
【貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6個月
