NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒(輔酶Ⅰ系列)
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注意事項(xiàng)：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
NOX（EC 1.6.99.3）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可在氧氣存在下，直接將NADH氧化為NAD。該酶不僅參與NAD的再生，而且與免疫反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理：
NOX能夠?qū)ADH氧化為NAD，NADH的氧化與2,6二氯酚靛藍(lán)（DCPIP）的還原相偶聯(lián)，藍(lán)色的DCPIP被還原為無色的DCPIP，在600nm下測(cè)定藍(lán)色DCPIP的還原速率計(jì)算出NADH氧化酶活性的大小。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL×1瓶，-20℃保存。
試劑二：液體10mL×1瓶，-20℃保存。
試劑三：液體1mL×1瓶，-20℃保存。
試劑四：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑五：液體6 mL×1瓶，4℃保存。
試劑六：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入5mL蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒(輔酶Ⅰ系列)
樣本的前處理：
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
①準(zhǔn)確稱取0.1g組織或收集500萬細(xì)胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
②將勻漿600g，4℃離心5min。
③棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心10min。
④上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的NOX（此步可選做）。
⑤步驟④中的沉淀即為線粒體，加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10秒，重復(fù)30次），用于NOX活性測(cè)定。
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