乙酰CoA(Acetyl-CoA)測(cè)試盒_三羧酸循環(huán)
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：10管/9樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
乙酰CoA廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰CoA匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化，經(jīng)過這條通路*氧化生成二氧化碳和水，釋放能量用于ATP合成。此外，乙酰CoA是合成脂肪酸，酮體及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。
乙酰CoA(Acetyl-CoA)測(cè)試盒_三羧酸循環(huán)
測(cè)定原理：
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸和NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰CoA和草酰乙酸生成檸檬酸和CoA。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng)，乙酰CoA含量和NADH的生成速率成正比，340nm下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰CoA含量的高低。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存。臨用前加入100μL試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：液體4μL×1支，4℃保存。臨用前加入100μL試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1瓶，-20℃保存。臨用前加入9mL試劑五充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：液體10mL×1瓶，4℃保存。
工作液的配制：臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×0.92 m L），將試劑二、三和四按照1:1:90的比例混合，或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻（可以測(cè)定9樣）；加樣前置37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴鍋中預(yù)熱30 min；現(xiàn)配現(xiàn)用；
乙酰CoA的提取：
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
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