三羧酸循環(huán)_線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
MCA是線粒體三羧酸循環(huán)的個(gè)中間產(chǎn)物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和MCA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，（3）乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和MCA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。
測(cè)定原理：
MCA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng)，生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出MCA的含量。
三羧酸循環(huán)_線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒
自備儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、蒸餾水。
試劑組成和配制：
酸性提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
堿性提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體2mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入6mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)液：液體1mL×1支，10μmol/mL檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
線粒體中檸檬酸提?。?br/>
稱0.05~0.1g樣品（建議稱0.1g樣本），加入0.5mL酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃離心5min；取上清至另一EP管中，11000g/min 4℃離心10min，棄上清（取300μL該上清液和300μL堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì)CA含量測(cè)定）；沉淀即線粒體，向沉淀中加入0.5mL酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），取此溶液300μL和300μL堿性提取液中和，混勻，置冰上待測(cè)（不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定）。
環(huán)保在線