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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：457發(fā)布時間：2014-02-04
上海酶聯(lián)生物研究所
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試驗原理：
AFP試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知AFP濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測。先將AFP和*標(biāo)記的抗體同時溫育。人甲胎蛋白ELISA 檢測試劑盒洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中AFP的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料
蒸餾水。
加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
振蕩器及磁力攪拌器等。
安全性
避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。
實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
操作注意事項
試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。人甲胎蛋白ELISA 檢測試劑盒底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致，ELISA 檢測試劑盒以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
樣品收集、處理及保存方法
血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑的準(zhǔn)備
標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備，不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。
洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
操作步驟
使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。
取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
在450nm波長處測定各孔的OD值。
局限
6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到的結(jié)果。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的AFP標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的AFP含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。
3、檢測值范圍：0-400ug/L
4、敏感度： 1.0 ug/L
Y160540 Anti-WBSCR14/ChREBP /FITC 熒光素標(biāo)記糖類應(yīng)答元件結(jié)合蛋白ChREBP抗體IgG 0.2ml
Y160541 Anti-CD64/PE 熒光素PE標(biāo)記免疫球蛋白G Fc段受體I 0.2ml
Y160542 Anti-CD184/CXC-R4/PE 熒光素PE標(biāo)記細(xì)胞表面趨化因子受體4抗體IgG 0.2ml
Y160543 Anti-Annexin V/PE 熒光素PE標(biāo)記兔抗人、大、小鼠、牛Annexin V抗體IgG 0.2ml
Y160544 Anti-factor VIII/PE 熒光素PE標(biāo)記第八因子相關(guān)抗原抗體IgG 0.2ml
Y160545 Anti-VWF/PE 熒光素PE標(biāo)記血管性血友病因子抗體IgG 0.2ml
Y160546 Anti-CD8/PE 熒光素藻紅蛋白標(biāo)記兔抗人、大、小鼠CD8抗體IgG 0.2ml
Y160547 Anti-TRF/Gold 金離子標(biāo)記抗轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體IgG 0.5ml(15nm)
Y160548 Anti-PSA ELISA 檢測試劑盒/Gold 膠體金離子標(biāo)記抗鼠抗人前列腺特異性抗原單克隆抗體(檢測)IgG 0.2ml
Y160549 人甲胎蛋白ELISA 檢測試劑盒Anti- Beta-HCG/Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗人β亞基人絨毛膜*單抗IgG 0.2ml
Y160550 Anti- Alpha -HCG/Gold 膠體金離子α 亞基人絨毛膜*單抗 IgG 0.2ml
Y160551 Anti-CD167a(DDR1)/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記CD167a抗體IgG 0.2ml
Y160552 Anti-GST-Tag/Biotin *標(biāo)記兔抗重組*轉(zhuǎn)移酶GST標(biāo)簽蛋白抗體IgG 0.2ml
Y160553 Anti-CEA/Biotin *化鼠抗人癌胚抗原單克隆抗體（檢測）IgG 0.2ml
商鋪：http://www.yixinui.com/st32881/
主營產(chǎn)品：ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒，植物ELISA試劑盒
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