Western一抗二抗清除劑(強堿性)免疫檢測

商品屬性：

商品介紹：

本品用于Western中轉(zhuǎn)移了蛋白的膜的重復(fù)利用。在Western中完成了一抗二抗結(jié)合和后續(xù)的化學(xué)發(fā)光檢測后，有時還需要檢測tubulin、actin等表達(dá)量相對穩(wěn)定的蛋白作為參照，或檢測其它蛋白進(jìn)行比較。通過使用一抗二抗去除液，充分去除一抗二抗，可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白。和重新跑一個SDS-PAGE膠相比，不僅省時省力，而且可以消除重新上樣而帶來的誤差，使可比性更強。

使用Western一抗二抗去除液多次重復(fù)使用同一張膜，會導(dǎo)致蛋白信號的減弱。但是，本W(wǎng)estern一抗二抗去除液，經(jīng)過多個抗體的檢測試驗，通?？梢灾貜?fù)利用膜3-5次。使用本試劑只需大約15-20分鐘即可實現(xiàn)蛋白膜的重復(fù)使用，然后可以進(jìn)行封閉等后續(xù)的Western操作。

不同的Western一抗二抗去除液主要在去除結(jié)合的一抗二抗的原理方面略有不同。分別依靠去垢劑、酸性、堿性、還原劑、螯合劑、鹽濃度以及一些特殊試劑等的不同組合來解除一抗二抗的結(jié)合，同時又不會導(dǎo)致轉(zhuǎn)移到膜上的蛋白的損失。

用于普通的Western檢測時蛋白膜上一抗二抗的去除可以任選一種去除液。如果是NC膜，即硝酸纖維素膜時，不宜選用YT071N。從時間角度考慮，強堿性、弱堿性和中性的去除液所需的時間都比較短，可以優(yōu)先考慮。從價格因素考慮，強堿性的去除液性價比高。從安全性考慮，中性的去除液由于沒有腐蝕性而表現(xiàn)出更高的安全性。弱堿性和弱酸性一抗二抗去除液的安全性次之。但只要正確操作，并進(jìn)行適當(dāng)防護(hù)，使用強堿性的一抗二抗去除液也是可行的。

　　對于特定的抗原和抗體，很難說哪一種Western一抗二抗去除液的效果好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳時，可以考慮適當(dāng)延長一抗二抗去除液的孵育時間，同時確保孵育時的溫度不低于20℃。溫度過低時一抗二抗的去除效果會下降。同時也可以考慮嘗試其它的一抗二抗去除液，以摸索出佳的適合您實驗條件的Western一抗二抗去除液。

注意事項：

1. 使用辣根過氧化物酶(HRP)，任何一次封閉(blocking)都應(yīng)當(dāng)使用5%脫脂牛奶，如果使用堿性磷酸酯酶，任何一次封閉都應(yīng)當(dāng)使用酪蛋白。

2. 為取得佳效果，推薦使用PVDF膜。但硝酸纖維素膜也可以使用本W(wǎng)estern一抗二抗去除液。

3. 使用化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western檢測適用本試劑。使用非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western檢測，例如DAB，NBT/BCIP，不適用于本試劑。

4. 本W(wǎng)estern一抗二抗去除液有輕微腐蝕性，使用時請注意防護(hù)。

儲存條件：室溫，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：