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蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2016-06-23 16:47:49瀏覽次數(shù):325次

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蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
☆試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
☆加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過大,否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。
☆孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
☆洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
☆反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
☆建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
☆建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對本試劑盒有任何疑問,可和所購經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。

標(biāo)本要求: 
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟
1、 取出試劑盒,于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2、 取出酶標(biāo)板,按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中。
3、空白微孔中加入50μl的樣品,空白對照加入50μl的蒸餾水;
4、 在樣品孔中加入10μl的生物素;(不含空白對照孔,切忌:生物素只加樣品孔!)
5、在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液;(不含空白對照孔)
6、將酶標(biāo)板用封口膠密封后,37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí);(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7、 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,保持各孔有充足的水壓;(濃縮洗滌液以1:100的比例與蒸餾水稀釋)
8、酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干;
9、各孔加入顯色劑A、B液各50μl;(不含空白對照孔)
10、20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘;
11、各孔加入50μl終止液,終止反應(yīng);

結(jié)果判斷
1、30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值;
2、以O(shè)D值為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),繪制曲線圖;
3、根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍;

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JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2) 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-2抗體    0.2ml    子科ZIKER
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phospho-Klf5/CKLF/Kruppel like factor 5 (pSer272) 磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體    0.2ml    子科ZIKER
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Mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記小鼠IgG(細(xì)胞流式同型對照)    0.1ml    子科ZIKER
Goat IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記羊IgG(細(xì)胞流式同型對照)    0.1ml    子科ZIKER
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Rabbit anti-mouse IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記兔抗小鼠IgG(H+L)    0.1ml    子科ZIKER
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Ku70(ATP dependent DNA helicase 2 subunit 1) DNA修復(fù)酶Ku70抗體    0.2ml    子科ZIKER
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Leptin receptor 瘦素受體抗體    0.2ml    子科ZIKER
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Lgr5/GPR49(G protein coupled receptor 49) Lgr5/GPR49抗體    0.2ml    子科ZIKER
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LH (Human Luteinizing Hormone) mouse monoclonal antibody 鼠抗人促黃體生成素抗體    0.2ml    子科ZIKER
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LH(Luteinizing Hormone) 抗人促黃體生成素抗體    0.2ml    子科ZIKER
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