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操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)
☆試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,避免交叉污染。
☆加樣:加樣時(shí),要控制加樣速度,避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過大,否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性;一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi),如果樣本數(shù)量過多,可使用多道移液器。
☆孵育:樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行。
☆洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡,避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
☆反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,10分鐘左右),如果顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
☆建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高,應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
☆建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,試用幾個(gè)標(biāo)本),如果對(duì)本試劑盒有任何疑問,可和所購(gòu)經(jīng)銷商,如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效,可要求調(diào)換,但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
相關(guān)產(chǎn)品如下:PAR-1 (Protease-activated receptors-1) 蛋白酶激活受體-1抗體 0.1ml 子科ZIKER
PAR-1 (Protease-activated receptors-1) 蛋白酶激活受體-1抗體 0.2ml 子科ZIKER
PAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受體-2抗體 0.1ml 子科ZIKER
PAR-2 (Protease-activated receptors-2) 蛋白酶激活受體-2抗體 0.2ml 子科ZIKER
dog IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記狗IgM 0.1ml 子科ZIKER
Goat IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記羊IgM 0.1ml 子科ZIKER
Guinea pig IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記豚鼠IgG 0.1ml 子科ZIKER
Guinea pig IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記豚鼠IgM 0.1ml 子科ZIKER
Horse IgG/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記馬IgG 0.1ml 子科ZIKER
Horse IgM/Cy3 熒光素Cy3標(biāo)記馬IgM 0.1ml 子科ZIKER
PAR4 (protease-activated receptor 4) 蛋白酶活化受體4/前列腺細(xì)胞凋亡反應(yīng)蛋白4抗體 0.2ml 子科ZIKER
Parkin protein 帕金蛋白抗體 0.2ml 子科ZIKER
PARP(poly ADP-ribose polymerase) 多腺苷二磷酸多聚酶抗體 0.2ml 子科ZIKER
PARP(poly ADP-ribose polymerase)N-Terminus 多腺苷二磷酸多聚酶抗體(N端) 0.2ml 子科ZIKER
PAX1(Paired box gene 1) 配對(duì)盒基因1抗體 0.2ml 子科ZIKER
PAX2(PAX2 Paired box gene 2) 配對(duì)盒基因2抗體 0.2ml 子科ZIKER
PAX3(Paired box gene 3) 配對(duì)盒基因3抗體 0.2ml 子科ZIKER
PAX5(Paired box gene 5) 配對(duì)盒基因5抗體 0.2ml 子科ZIKER
Rat IgM/FITC 熒光素標(biāo)記大鼠IgM 0.3ml 子科ZIKER
rHIL-1Ra/FITC 熒光素標(biāo)記重組人白介素-1受體拮抗劑 0.3ml 子科ZIKER
KLH/FITC 熒光素標(biāo)記血藍(lán)蛋白 0.3ml 子科ZIKER
PAX7(Paired box gene 7) 配對(duì)盒基因7抗體 0.2ml 子科ZIKER
PAX8(Paired box gene 8) 配對(duì)盒基因8抗體 0.2ml 子科ZIKER
PAX9(Paired box gene 9) 配對(duì)盒基因9抗體 0.2ml 子科ZIKER
P-cadherin(placental) P-鈣粘附分子抗體 0.1ml 子科ZIKER
P-cadherin(placental) P-鈣粘附分子抗體 0.2ml 子科ZIKER
LI-cadherin(liver-intestine cadherin) 肝腸鈣粘連蛋白抗體 0.2ml 子科ZIKER
PCNA (Proliferation Cell Nuclear gen)origin: human, mouse, rat, rabbit, horse, bovine, dog, chicken and sheep 增殖細(xì)胞核抗原抗體 0.1ml 子科ZIKER