本試劑盒采用雙抗體夾心兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預(yù)包被抗大鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入大鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)校準(zhǔn)品和待測樣本，再加入shengwusu標(biāo)記抗體，經(jīng)過溫育與充分洗滌后，再加入HRP偶聯(lián)的親和素，經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-shengwusu標(biāo)記抗體-親和素酶的夾心復(fù)合物。加底物A和B，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值）與待測樣品中大鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計算出樣本中大鼠Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)的濃度。