細(xì)胞凍存與復(fù)蘇
細(xì)胞凍存：
選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，保證活率大于90%。
制備細(xì)胞凍存液：45%新鮮培養(yǎng)基，45%條件培養(yǎng)基，10%DMSO。
200g離心5分鐘，棄去上清。
用細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞凍存密度為1.2~2×107/ml/ml。
迅速轉(zhuǎn)移重懸的細(xì)胞至無菌的凍存管中，每管1~2ml。
將凍存管放入程序降溫盒中，-70℃冰箱放置過夜。
若凍存細(xì)胞需要長期保存，將其轉(zhuǎn)移至液氮罐中。
細(xì)胞復(fù)蘇：
將凍存管迅速轉(zhuǎn)移至27℃水浴中，進(jìn)行融化。
將融化的細(xì)胞轉(zhuǎn)至無菌的含5-10ml新鮮培養(yǎng)基的無菌離心管中。
200g低速離心5分鐘，緩慢倒掉上部培養(yǎng)基，不要將沉降的細(xì)胞懸起。
用10-20ml新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，確保重懸后的細(xì)胞密度大于1×106/ml左右。
將重懸的細(xì)胞放入無菌培養(yǎng)瓶中，旋蓋擰松，放在搖床中懸浮培養(yǎng)。
當(dāng)細(xì)胞密度生長達(dá)到2~4×106/ml時，可以進(jìn)行傳代，傳代時細(xì)胞接種密度為0.8-1×106/ml。

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細(xì)胞培養(yǎng)基

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