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人白細胞分化抗原40配體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用方法

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  人白細胞分化抗原40配體酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用方法
  
  檢測范圍:48T
  
  30ng/L-2000ng/L
  
  使用目的:
  
  本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中白細胞分化抗原40配體(CD40L)含量。
  
  實驗原理
  
  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白細胞分化抗原40配體水平。用純化的人抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入40L,再與HRP標記的40L抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的40L呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度,通過標準曲線計算樣品中人白細胞分化抗原40配體濃度。
  
  試劑盒組成
  
  120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶
  
  2酶標試劑3ml×1瓶8標準品(2000ng/L)0.5ml×1瓶
  
  3酶標包被板12孔×4條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
  
  4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份
  
  5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張
  
  6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個
  
  標本要求
  
  1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
  
  2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
  
  操作步驟
  
  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
  
  1000ng/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  500ng/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  250ng/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  125ng/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  62.5ng/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
  
  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  
  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  
  配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
  
  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  
  加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  
  溫育:操作同3。
  
  洗滌:操作同5。
  
  顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  
  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  
  測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
  
  操作程序總結:
  
  計算
  
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
  
  注意事項
  
  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  
  2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
  
  3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
  
  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
  
  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  
  6.底物請避光保存。
  
  7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
  
  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
  
  9.本試劑不同批號組分不得混用。
  
  10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
  
  保存條件及有效期
  
  1.試劑盒保存:;2-8℃。
  
  2.有效期:6個月

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