轉(zhuǎn)運(yùn)RNA（tRNA）是一種由76-90個核苷酸（nt）組成的RNA分子，它的經(jīng)典功能是在蛋白質(zhì)翻譯過程中負(fù)責(zé)將mRNA序列轉(zhuǎn)譯為氨基酸序列。tRNA具有三葉草形的二級結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)由氨基酸接受莖、D（二氫尿苷酸）莖環(huán)、反密碼子莖環(huán)和TψC莖環(huán)（ψ代表假尿苷酸）組成。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，在人和動植物中，tRNAs可被切割加工，產(chǎn)生多種小RNAs。當(dāng)切割位于反密碼子環(huán)時，產(chǎn)生5′和3′ tRNA半分子（tRNA halves）；當(dāng)切割位于TψC環(huán)時，產(chǎn)生3′ tRNA衍生的小RNA（3′ tsRNA）；而當(dāng)切割發(fā)生在D環(huán)、D莖或5′反密碼子莖時，則產(chǎn)生5′ tRNA衍生的小RNA (5′ tsRNA)。

在植物中，5′ tRNA half和5′ tsRNA是豐度的兩類tRNA衍生小RNAs，但其產(chǎn)生機(jī)制以及生物學(xué)功能尚不明確。清華大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院戚益軍課題組利用新開發(fā)的小RNA測序方法，系統(tǒng)分析了模式植物擬南芥中5′ tRNA halves和5′ tsRNAs，并發(fā)現(xiàn)5′ tsR-Ala通過調(diào)節(jié)靶基因CYP71A13的表達(dá)和植保素的合成，從而調(diào)控植物抗真菌防衛(wèi)反應(yīng)。

相關(guān)研究論文“一個5′ tRNA-Ala衍生的小RNA調(diào)控植物抗真菌防衛(wèi)反應(yīng)" （A 5′ tRNA-Ala-derived small RNA regulates anti-fungal defense in plants）在線發(fā)表在《中國科學(xué)》（SCIENCE CHINA Life Sciences）上。

在這項研究中，戚益軍課題組首先針對tRNA衍生小RNAs的特征，開發(fā)了一種基于RtcB連接酶的小RNA文庫構(gòu)建及測序方法（RtcB sRNA-seq），該方法能夠同時捕捉并定量區(qū)分末端為3′羥基和3′磷酸/環(huán)磷酸的小RNAs。利用RtcB sRNA-seq，系統(tǒng)鑒定分析了擬南芥幼苗中5′ tRNA halves和5′ tsRNAs，發(fā)現(xiàn)80個tRNAs可產(chǎn)生近千個5′ tRNA halves和5′ tsRNAs，其中tRNA-Ala、tRNA-Gly和tRNA-Glu衍生的5′ tRNA halves和5′ tsRNAs豐度。tRNA-Ala主要產(chǎn)生19-nt的 5′ tsR-Ala，tRNA-Gly主要產(chǎn)生18-nt的5′ tsR-Gly和35-nt 5′ tRNA-Gly half，而tRNA-Glu則主要產(chǎn)生15-nt的5′ tsR-Glu和35-nt 5′ tRNA-Glu half（圖1）。

該研究進(jìn)一步著重探索了5′ tsRNAs的產(chǎn)生機(jī)制及生物學(xué)功能。通過分析RNase T2家族RNA內(nèi)切酶RNS1至RNS5突變體中5′ tsRNAs的積累，發(fā)現(xiàn)RNS1和RNS3負(fù)責(zé)產(chǎn)生包括5′ tsR-Ala在內(nèi)的眾多5′ tsRNAs。為了研究5′ tsRNAs的生物學(xué)功能，利用RNA測序方法分析了rns1和rns3突變體的基因表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)突變體中大量參與植物抗真菌的茉莉酸信號通路基因上調(diào)表達(dá)。灰霉菌接種實(shí)驗(yàn)表明，與野生型植物相比，rns1和rns3突變體更抗灰霉菌侵染（圖2）。這些結(jié)果說明RNS1和RNS3可通過切割tRNAs產(chǎn)生5′ tsRNAs，負(fù)調(diào)控植物對灰霉菌的抗性。

該研究最后闡明了其中一個豐度的5′ tsRNA，19-nt 5′ tsR-Ala的功能。發(fā)現(xiàn)5′ tsR-Ala能夠與AGO1結(jié)合，并切割與其序列互補(bǔ)的靶標(biāo)CYP71A13 mRNA，從而負(fù)調(diào)控CYP71A13基因的表達(dá)。CYP71A13編碼植保素（植物產(chǎn)生的一種抗菌分子）合成途徑中的一個關(guān)鍵酶。利用短串聯(lián)模擬靶標(biāo)（STTM）技術(shù)沉默5′ tsR-Ala，發(fā)現(xiàn)在5′ tsR-Ala沉默的植物中， CYP71A13表達(dá)上升，植保素含量增加，對灰霉菌抗性增強(qiáng)。特別有意思的是，研究發(fā)現(xiàn)植物在受到灰霉菌侵染時，包括5′ tsR-Ala在內(nèi)的眾多5′ tsRNA積累水平下降。

根據(jù)上述結(jié)果，該研究提出了植物中5′ tsR-Ala調(diào)控植物抗真菌防衛(wèi)反應(yīng)的工作模型（圖3）。在沒有真菌侵染的情況下，植物通過RNS1和RNS3切割tRNA-Ala生成5′ tsR-Ala，5′ tsR-Ala與AGO1結(jié)合，切割CYP71A13 mRNA，從而抑制植保素合成和植物對真菌的防衛(wèi)反應(yīng)；而當(dāng)真菌入侵時，植物通過下調(diào)5′ tsR-Ala的產(chǎn)生水平，增強(qiáng)CYP71A13的表達(dá)和植保素的合成，從而激活植物的防衛(wèi)反應(yīng)