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大鼠超氧自由基(SOR)

閱讀:766發(fā)布時間:2012-12-18

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大鼠超氧自由基(SOR) 操作步驟
1.   標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
90pg/ml  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
45pg/ml  4 號標準品  150µl 的5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
22.5 pg/ml  3 號標準品  150µl 的4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
11.25pg/ml  2 號標準品  150µl 的3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
5.625pg/ml  1 號標準品  150µl 的2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
 
 
2.   加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10 µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.   溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6.   加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。  
7.   溫育:操作同 3。
8.   洗滌:操作同 5。
9.   顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。  測定應在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。

大鼠超氧自由基(SOR) 注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值
大于標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
大鼠超氧自由基(SOR) 保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月


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