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廠(chǎng)商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
所 在 地南京市
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更新時(shí)間：2016-12-27 14:43:36瀏覽次數(shù)：1300次
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經(jīng)營(yíng)模式：經(jīng)銷(xiāo)商
商鋪產(chǎn)品：9990條
所在地區(qū)：江蘇南京市
聯(lián)系人：董老師 （銷(xiāo)售）
細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程，而是主動(dòng)過(guò)程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的
流 式 法
一、服務(wù)介紹
細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程，而是主動(dòng)過(guò)程，它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用，它并不是病理?xiàng)l件下，自體損傷的一種現(xiàn)象，而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個(gè)系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅是一種特殊的細(xì)胞死亡類(lèi)型，而且具有重要的生物學(xué)意義及復(fù)雜的分子生物學(xué)機(jī)制。凋亡是多基因嚴(yán)格控制的過(guò)程。
二、實(shí)驗(yàn)原理
Annexin V/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞凋亡：在正常細(xì)胞中，磷脂酰*（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰*（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V是一種Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰*有高度親和力，故可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰*與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進(jìn)行熒光素標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin V作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。碘化丙啶（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但對(duì)凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過(guò)細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。
三、實(shí)驗(yàn)流程
1.細(xì)胞培養(yǎng)，接種6孔板；
2.按的方式誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
3.不含EDTA的*消化貼壁細(xì)胞并離心收集；
4.重懸細(xì)胞，加Annexin V/PI染色；
5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)；
6.結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。
四、服務(wù)說(shuō)明
1.客戶(hù)提供：培養(yǎng)好的細(xì)胞以及所需藥品
2.公司提供：基本實(shí)驗(yàn)步驟、流式圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果、剩余藥品。
3.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周左右，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。
TUNEL法
二、實(shí)驗(yàn)原理
TUNEL法（terminal dexynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記測(cè)定法），也稱(chēng)DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法。細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過(guò)程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300 kb的大片段，然后大約30%的染色體DNA在Ca2+和Mg2+依賴(lài)的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180～200 bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的3’-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過(guò)氧化物酶、堿性磷酸化酶或*形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’-末端，再用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素與衍生物上*結(jié)合（每個(gè)鏈霉親和素至少可以再結(jié)合3個(gè)*分子），zui后用DAB、過(guò)氧化氫與辣根過(guò)氧化物酶發(fā)生氧化、環(huán)化反應(yīng)，形成苯乙肼聚合物而呈現(xiàn)棕褐色，zui終通過(guò)計(jì)數(shù)每張切片上不同視野中TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞的比例來(lái)判斷細(xì)胞凋亡發(fā)生情況。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒(méi)有DNA的斷裂，因而沒(méi)有3’-OH形成，很少能夠被染色。
三、實(shí)驗(yàn)流程
1.收集處理后的細(xì)胞或石蠟切片脫蠟至水。
2.過(guò)氧化氫甲醇中浸洗，抑制內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶。
3.用蛋白酶K室溫孵育15~30分鐘。
4.滴加TUNEL反應(yīng)混合液（即配即用，4oC避光），孵育60分鐘，在熒光鏡下（綠色）分析結(jié)果。
5.加入轉(zhuǎn)化劑-POD，孵育20~30 min。
6.加入DAB底物溶液，孵育5~10 min。
8.中性樹(shù)膠或者甘油封片，光鏡下分析結(jié)果。
四、服務(wù)說(shuō)明
1.客戶(hù)提供：培養(yǎng)好的細(xì)胞以及所需藥品；或者提供石蠟標(biāo)本
2.公司提供：基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果、剩余藥品
3.實(shí)驗(yàn)周期: 2-3周左右，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。
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